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在hplc发展的早期,常采用“等密度法”来填装柱。多孔硅胶的骨架密度较高。例如,lichrospher 100的表观密度约为2.3g/cm3,lichrospher 500 为2.46g/cm3,lichrospher 1000 为2.49g/cm3。不同牌号的硅胶因制法不同(例如,含有超细孔和封闭孔者表观密度小)而有差异,但多在2.2g/cm3以上。因此,需以高密度溶剂配制密度与硅胶骨架密度相近的混合液。常使用的高密度溶剂为碘代和代烷类(表12-2-3),再与适当比例的其他溶剂相配,配制出具有密度适宜的液体,使填料能呈“失重”状态悬浮于匀浆液中,以从容地用高压泵将其压入空色谱柱中,制出填装均匀的色谱柱。
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在食品分析中
1.脂肪酸---分析;
2.农i药残留分析;
3.香精香料分析;
4.食品添加剂分析;
5.食品包装材料中挥发物的分析。
在医i药分析中
毛细管气相色谱原理图
1.雌三醇测定;
2.尿中孕二醇和孕三醇测定;
3.尿中胆甾醇测定;
4.儿茶酚胺代谢产物的分析;
5.---中---、麻i醉剂以及---酸衍生物的分析;
6.---中睾i丸激i素的分析;
7.某些挥发---u物的分析。
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柱填料的选择关系到色谱分离的可能性,而柱规格的选择直接影响分析速度、分离能力、检测能力及每次分析的溶剂消耗等。
柱规格包括两方面:柱内径和柱长度。柱内径,分析型一般为2~6 mm,制备型20 mm,大者可达80 mm;柱长度,分析型5~30 cm,制备型15~50 cm。
一般来说,柱内径不影响分离度与分析时间的关系。今天,---及---添加类标准品实验室耗材,柱技术已发展到不同柱内径的柱子能够具有相同的性能。不同内径的柱子又各具特点,对相同的分析时间和分离度来说,内径大的柱子比内径小的柱子多消耗溶剂。另一方面,较小内径的柱子对相同的检测信号来说所需样品量亦较少。
因此,在样品量有限i时,可使用小内径柱。柱长度增加虽可---分离效果,但阻力也随之增加,必须提高入口压力。柱压是同时影响增加分离度和减少分析时间的主要障碍。分离度、分析时间及柱压三者相互制约,选择好其中两者,则第3个因素也就选好了。长柱可以给出高分离度,短柱可提供快速分离,我们可以根据样品情况去选用合适的色谱柱。
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